橄榄油中脂肪酸烷基酯含量测定 气相色谱-质谱法（BJS 202105）解读

　　橄榄油含有丰富的不饱和脂肪酸、多种脂溶性维生素及抗氧化物，有利于调节人体甘油三酯水平、保护心血管、防止血管硬化。我国橄榄油消费量近几年呈现上升趋势。

什么是脂肪酸烷基酯
　　国内外橄榄油标准中均对橄榄油进行了严格的等级划分。在各种等级的橄榄油中，特级初榨橄榄油是顶级油品，与次级油品的价格差异非常大。根据相关规定，特级初榨橄榄油必须在低温下采取机械式压榨的方法生产，不经蒸馏或其他精炼过程。但是，一些不法商家为了牟利，试图把次级油品经低温脱臭，去除因橄榄果实过熟、保存不佳等带来的发酵异味，然后冒充特级初榨橄榄油销售。
　　脂肪酸烷基酯（FAAEs）是游离脂肪酸与橄榄果发酵产生的低级醇类物质反应产生的，主要有脂肪酸甲酯（FAMEs）和脂肪酸乙酯（FAEEs）。在低等级的橄榄灯油中，脂肪酸烷基酯的含量高于70 mg/kg，脂肪酸乙酯与脂肪酸甲酯含量比的平均值大于5.0；且经过低温脱臭后，橄榄油中的脂肪酸烷基酯含量不会降低，因此，可以作为判断特级初榨橄榄油品质的指标。
　　为了保护消费者的合法权益，欧盟和国际橄榄油理事会均制定了特级初榨橄榄油中脂肪酸烷基酯的限量标准，现行标准均要求脂肪酸乙酯（FAEEs）含量之和不大于35 mg/kg。在我国，2021年发布的国家标准GB/T 233472021《橄榄油、油橄榄果渣油》中规定，特级初榨橄榄油中脂肪酸乙酯（棕榈酸乙酯、硬脂酸乙酯、油酸乙酯和亚油酸乙酯）含量不大于35 mg/kg。

脂肪酸烷基酯的检测方法
　　国际橄榄油理事会先后发布了多个版本的检测方法，分别是：COI/T.20/Doc. No 28/Rev.1 2010、COI/T.20/ Doc. No 31 November 2012、COI/T.20/Doc. No 28/ Rev. 2 2017和COI/T.20/Doc. No 28/ Rev. 3 2022，现行的方法版本为COI/T.20/Doc. No 28/ Rev. 3 2022。这些方法前处理过程均需要手工填充硅胶层析柱，存在操作复杂、耗时长、重复性差、不便于大批量样品处理等问题；检测仪器选择的是气相色谱-火焰离子化检测器进行检测，仪器的灵敏度与抗干扰能力较差。考虑到高通量检验对前处理快速简便的要求，本方法在查阅国内外文献和大量实验的基础上，采用商品化硅胶固相萃取柱代替手工填充硅胶柱进行前处理净化，用于目标物与甘油三酯分离；检测时采用气相色谱-质谱法代替气相色谱法，并采用内标法定量。分别采用本方法与国际橄榄油理事会COI/T.20/ Doc. No 28/ Rev. 2 2017方法对同一样品进行了比较测试，通过t检验比较两方法测定结果的差异，棕榈酸乙酯、亚油酸乙酯、油酸乙酯和硬脂酸乙酯的t值分别为0.99、0.43、0.30和1.43，两方法对样品的测定结果无明显差异（P=0.05，t＜2.776）。

操作要点
　　1.方法适用范围。本方法适用于橄榄油中棕榈酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亚油酸甲酯、棕榈酸乙酯、硬脂酸乙酯、油酸乙酯和亚油酸乙酯含量定性和定量测定。脂肪酸烷基酯为脂肪酸与低级醇形成的一类化合物，橄榄油中主要脂肪酸为棕榈酸、硬脂酸、油酸和亚油酸，而低级醇主要为甲醇和乙醇。结合国外标准和文献资料，最终确定的本方法检测对象为棕榈酸甲酯（Me C16:0）、棕榈酸乙酯（Et C16:0）、亚油酸甲酯（Me C18:2）、油酸甲酯（Me C18: 1）、硬脂酸甲酯（Me C18:0）、亚油酸乙酯（Et C18:2）、油酸乙酯（Et C18:1）和硬脂酸乙酯（Et C18:0）共8种化合物。
　　2.标准溶液的保存。8种脂肪酸烷基酯储备液于18℃可保存3个月，中间溶液于4℃可保存1个月。比较了储备液-18℃放置3个月和中间溶液4℃放置1个月后的单位响应值（响应值除以溶液浓度），与新配制的溶液之间的差异，通过t检验发现均无显著性差异。但需要注意的是，正己烷较易挥发，各浓度标准溶液在保存时均应注意密封完好，以免溶剂挥发造成浓度改变。
　　3.固相萃取柱的选择与保存。我们对市售4个品牌的1 g硅胶固相萃取柱本底进行考察，发现2个品牌均检出脂肪酸甲酯本底值，其中1个品牌的脂肪酸甲酯本底值远高于定量限浓度，故建议每批次商品化硅胶固相萃取柱在使用前进行本底检测，选择对检测无干扰的固相萃取柱。硅胶容易吸潮，导致吸附性能改变，建议选择小规格真空包装的硅胶固相萃取柱，避免拆封后的色谱柱长期保存。
　　4.试样处理。硅胶固相萃取柱在使用前需用正己烷淋洗活化，并确保萃取柱不会干涸。正己烷+乙醚（99+1）淋洗液需现配现用，避免长期放置导致两者比例发生变化。
　　5.气相色谱柱的选择。脂肪酸烷基酯极性较弱，故考虑使用实验室最常见的5 %苯基-甲基聚硅氧烷键合毛细管色谱柱进行分离，经验证，该色谱柱可以对8种目标物及1种内标物进行分离，且峰形对称，基线平稳。但因为键合技术的不同，各品牌的气相色谱柱分离性能略有差异，可根据实际情况调整色谱分离条件。

□武汉食品化妆品检验所 候 靖