来源：中国市场监管报
发布时间：2025-10-21
4.净化方式的选择和优化
（1）离心：本方法考察不同离心速率和不同离心时间的离心效率，结果表明，当离心转速越高时，下层样品越紧实，上层溶液越澄清，便于将全部上清液转移。当离心的转速较低时，轻微晃动就可引起溶液浑浊，不能有效转移出全部上清液。当转速为12000 r/min时，离心效果与15000 r/min无明显差异。离心5 min和10 min之间基本无差异且都优于离心3 min。因此，结合各实验室离心机的转速限制，本方法选择12000 r/min离心5 min作为离心条件。
（2）固相萃取：本方法考察了不同固相萃取柱对不同基质中新品红、曙红和猩红的净化效果。实验首先使用加标量为0.50 mg/kg的腊肠基质提取液过PWAX+R1、PWAX+R2、PWAX、PA + R1、PA + R2、PA、PAX、WAX、MAX、PCX十种洗脱型SPE净化柱进行对比，结果表明于新品红、曙红和猩红而言，在上述洗脱型SPE中均无保留，因此，不能使用洗脱型SPE净化柱进行净化。
选取C18、Florisil、PRiME HLB、PSA、PEP、中性氧化铝六种通过型SPE净化柱，使用样品提取液直接过柱接收的方式进行对比实验，结果表明，PRiME HLB作为一种能够有效去除样品中脂肪和蛋白质的SPE小柱，对辣椒粉、辣椒油、辣椒酱、腊肠基质中的新品红、曙红和猩红均有较好的回收率，因此本方法选取PRiME HLB固相萃取柱作为净化小柱。同时，对上样体积和洗脱溶液的体积进行了优化，上样体积为2.5 mL、洗脱溶液体积为10 mL时，结果最佳。
5.定容溶剂的选择
不同定容溶剂对目标化合物的溶解性不同，同时影响其峰型和离子化效率，因此对定容溶剂进行优化。实验选用水、甲醇、不同比例的甲醇水溶液、乙醇和初始流动相（5 mmol/L乙酸铵溶液-乙腈，95+5，V/V）作为定容溶剂进行对比，结果表明当使用甲醇作为定容溶剂，新品红、曙红和猩红的色谱峰响应值最高，因此选用甲醇作为定容溶剂。
6.微孔滤膜的选择
实验考察了0.45μm疏水PVDF、0.45μm有机尼龙、0.45μm疏水PTFE、0.22μm疏水PTFE、0.45μm疏水PES、0.22μm疏水PES等10种微孔过滤器对新品红、曙红和猩红的吸附影响，其中0.45μm疏水PTFE滤膜对目标化合物的吸附效果最小。
7.基质效应
通过绘制溶剂标准曲线和基质匹配标准曲线，按照[(基质匹配标准曲线的斜率-溶剂标准曲线的斜率）/溶剂标准曲线的斜率]×100%来评价基质效应。经验证，实际样品中结果表明四种基质中新品红的基质效应在7.73%～-21.20%，曙红的基质效应在8.15%～-44.00%，猩红的基质效应在32.17%～-59.52%，均为基质抑制效应，因此本实验的基质效应会对实验结果产生影响，需要通过配制基质匹配标准曲线来扣除基质带来的影响。
标准中常见的问题及注意事项
在同一批次进行多种基质样品检测时，可能出现不确定选用哪种基质作为阴性样品配制基质曲线的情况，实验中选取了干辣椒、辣椒粉、酱、腊肠四种空白基质制作基质标准曲线，比较线性关系，结果表明不同基质绘制的空白基质曲线斜率偏差新品红为7.2%，曙红为19.3%、猩红为23.7%，因此实验过程中若选取其中一种基质配制曲线，校正不同基质样品时，可做相应基质空白样品的加标回收，折算回收率。
□中国肉类食品综合研究中心 王 妍 赵文涛 郭文萍
